凝集素選購(gòu)指南

凝集素（Lectin）是指一種從各種植物，無(wú)脊椎動(dòng)物和高等動(dòng)物中提純的糖蛋白或結(jié)合糖的蛋白，因其能凝集紅血球（含血型物質(zhì)），故名凝集素。其常見(jiàn)種類見(jiàn)表6-1。常用的為植物凝集素（Phytoagglutin, PNA），通常以其被提取的植物命名，如刀豆素A（Conconvalina,ConA）、麥胚素（Wheat germ agglutinin, WGA）、花生凝集素（Peanut agglutinin, PNA）和大豆凝集素（Soybean agglutinin, SBA）等，凝集素是它們的總稱。凝集素不是來(lái)源或參與免疫反應(yīng)的產(chǎn)物，它們之所以被收入本書(shū)，是由于凝集素具有的某些“親合”特性，能被免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)方法所應(yīng)用。因此，Ponder（1983）提出應(yīng)稱“凝集素組織化學(xué)”而不能稱為“凝集素免疫組織化學(xué)”。

中文名

凝集素

外文名

Lectin

常用的

植物凝集素、花生凝集素等

提取物

糖蛋白或結(jié)合糖的蛋白

主要形式存在

以糖蛋白和糖脂的形式存在

特    征

多價(jià)結(jié)合能力等

分類

凝集素可按糖的特異性、分子結(jié)構(gòu)、結(jié)合位點(diǎn)和其功能進(jìn)行分類。動(dòng)物凝集素按分子結(jié)構(gòu)分為C-型凝集素、S-型凝集素、P-型凝集素、I-型凝集素和正五聚蛋白（Pentraxins）。C-型凝集素是Ca2+依賴的凝集素；S-型凝集素是特異性識(shí)別β-半乳糖苷鍵的凝集素；P-型凝集素是特異性識(shí)別6磷酸甘露糖的凝集素；I-型凝集素是類似免疫球蛋白的凝集素；正五聚蛋白（Pentraxins）是有五個(gè)亞基的凝集素。

糖—凝集素—糖法：

本法是利用過(guò)量的凝集素與組織切片中特定的糖基相結(jié)合。經(jīng)沖洗后，凝集素上還存在未被占用的結(jié)合部位，將這些部位與有過(guò)氧化物酶標(biāo)記的特異性糖基相結(jié)合，形成一個(gè)三明治樣的糖—凝集素—糖的結(jié)合物。

（1）脫蠟至水。

（2）用含3%的H2O2的甲醇阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶10min。

（3）用100μg/ml的凝集素孵育30min。

（4）TBS洗3次，每次3min。

（5）用100μg/mlHRP標(biāo)記的糖液孵育30min。

（6）TBS洗3次，每次3min。

（7）DAB呈色、脫水、透明、封固。

本法特異性強(qiáng)，靈敏度高，因?yàn)檫@不象生物素—抗生物素法那樣要改變凝集素，又不需要像抗體那樣要制備抗體。HRP本身含有甘露糖，能與刀豆凝集素A、扁豆凝集素和豌豆凝集素結(jié)合。但對(duì)其它的凝集素，本法目前普及還有一定困難，因?yàn)橐獙⑦^(guò)氧化物酶結(jié)合到其它凝集素上，就需要將一個(gè)適當(dāng)?shù)奶妓衔锘鶊F(tuán)嵌入過(guò)氧化物酶，稱為糖基化（glycosylation），方法雖不復(fù)雜（Lee 等1976），但需一定的試劑和設(shè)備。商品化能提供的糖基化過(guò)氧化物酶品種尚有限。

凝集素結(jié)合特異性指南

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