biontex Proteofection常見問題解答

PROTEOfectene®和PROTEOfectene® AB是含有 Proteofectene®AB 的脂質制劑，專為抗體的蛋白轉染而開發。

您感興趣的蛋白質或抗體中存在的任何雜質、污染物或添加劑都可能影響PROTEOfectene®或PROTEOfectene® AB 的遞送效率。因此，使用盡可能純的蛋白質/抗體。
如果與感興趣的蛋白質相比存在過多的穩定劑，例如去污劑，則可以抑制遞送。穩定劑如甘油或其他類似的添加劑不會干擾蛋白質的傳遞。

抗體溶液中的 BSA 會抑制抗體遞送！0.1% 到 2% BSA 是抗體溶液中的常見濃度——這意味著 1 mg/ml 到 20 mg/ml。在這些溶液中，BSA 的比例大大超過了抗體。BSA 在抗體PROTEOfectene® AB 復合物形成期間與抗體競爭，因此抑制抗體遞送。

如果防腐劑如疊氮化納以高濃度存在，則可能會導致細胞毒性。如有必要，可通過透析去除。

PROTEOfectene®是一種基于脂質的制劑，可與蛋白質形成非共價復合物。這些復合物被細胞內化，蛋白質被釋放到細胞質中。
只需將您感興趣的蛋白質與PROTEOfectene®在 1xPBS 中孵育10-15 分鐘，用無血清培養基稀釋，然后將混合物應用于您的細胞，3-48 小時后，您就可以檢測蛋白質活性了。

由于它們的特定特性，某些蛋白質可能無法通過PROTEOfectene®有效遞送。因此，在生理條件下帶正電荷的堿性蛋白質很難被引入細胞。另一個原因可能是前蛋白的雜質（例如去污劑、防腐劑、穩定劑）。

與使用轉染 DNA 的基因表達研究相比，蛋白質轉染 (Proteofection) 的速度非常快，因為它繞過了轉錄和翻譯等細胞過程。此外，避免了潛在有害的隨機 DNA 整合到目標細胞的基因組中。PROTEOfectene®可以將活性蛋白質直接輸送到細胞中，用于涉及細胞周期、細胞凋亡和許多其他因素的各種問題的研究。

R-藻紅蛋白 (100 µg/ml) 與PROTEOfectene® 一起提供作為陽性對照。以 1:2 的蛋白質：脂質比使用它（對于 1 μg 蛋白質，需要2 μl PROTEOfectene®）。
R 藻紅蛋白已被輸送到許多不同的細胞中，因此成功輸送的可能性很高。提供此對照蛋白是為了幫助您設置實驗，并且應該用于您實驗的每個新細胞系。如果細胞毒性是一個問題，陽性對照使用戶能夠確定遞送的蛋白質是否影響細胞活力。

FITC 標記的 IgG（陽性對照，100 μg/ml）是一種熒光標記的抗體（免疫球蛋白）作為陽性對照。以 1:1 – 1:2 的抗體：試劑比例使用（對于 1 μg 抗體，需要 1-2 μl PROTEOfectene® AB）。提供此對照抗體是為了幫助您設置實驗，并且應該用于您實驗的每個新細胞系。FITC-IgG 已被輸送到許多不同的細胞中；因此，成功運輸的可能性很高。