?雜交瘤技術概述 - Creative Biolabs

雜交瘤技術概述 - Creative Biolabs

“Creative Biolabs 致力于以品質提供高度定制化的綜合解決方案，以推進全球客戶的研究項目。"

1975年，Kohler 和 Milstein 開發了雜交瘤技術。該技術將產生抗體的 B 細胞與永生性癌細胞系融合，從而創建出能夠無限期產生抗體的永生化雜交瘤細胞系。雜交瘤技術是現代研究中應用廣泛的技術之一。

針對不同研究目標，研究人員會采用多樣化的免疫策略來獲取 B 細胞。當動物的血清中產生足量抗體后，將對其進行優化。

取出已處死動物的脾臟，并在無菌條件下分離活化的 B 細胞。通過 ELISA 等檢測方法鑒定血清中由活化 B 細胞產生的抗體。隨后，將這些活化的 B 淋巴細胞與骨髓瘤細胞進行融合。

在細胞融合前幾周，需在 8-氮雜鳥嘌呤中培養轉移性腫瘤細胞，以獲得次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶（HGPRT）基因功能缺失的骨髓瘤細胞（這是雜交瘤技術的方法）。

細胞融合是將活化的 B 淋巴細胞與 HAT 敏感型骨髓瘤細胞進行融合的過程。在此步驟中，將新鮮獲取的活化 B 細胞與 HAT 敏感型骨髓瘤細胞在促融介質中離心混合。電融合是另一種融合方法，即細胞在電場作用下發生融合。

即使采用高效的融合技術，也只有 1–2% 的細胞能成功形成雜交瘤細胞。因此，雜交瘤篩選至關重要。目前的篩選主要是在 HAT 培養基中孵育細胞混合物 10–14 天。在此過程中，氨基蝶呤的存在阻斷了細胞通過從頭合成途徑合成核苷酸的能力。而次黃嘌呤和脫氧胸苷則使攜帶功能性 HGPRT 基因的細胞能夠通過補救途徑存活。因此，源自 B 淋巴細胞并攜帶功能性 HGPRT 基因的雜交細胞得以存活，而未融合的 B 細胞和惡性腫瘤細胞則被淘汰。

對雜交瘤進行篩選，挑選出能產生針對抗原特定表位抗體的克隆。

在大型培養容器或培養瓶中克隆并增殖雜交瘤細胞。

目前，單克隆抗體可通過體外和體內兩種方式生產。在體內，通常使用小鼠腹水法生產單克隆抗體；而在體外，則是培養雜交瘤細胞并利用培養基分離單克隆抗體。

圖 1. 雜交瘤技術的應用。(Mitra, S., et al., 2021)

Creative Biolabs 很高興能分享我們在雜交瘤領域的專業知識與經驗，以促進客戶的研究。

雜交瘤技術的優勢

1.產生高純度和高特異性的抗體。

2.高度可重現且可擴展。

3.用于進行高靈敏度和高特異性的檢測。

4.抗體可以通過體外方法獲得。

5.抗原或免疫原的純度并非必要條件。

6.有助于識別針對特定抗原的正確克隆。

7.體內抗體的產生確保了可變結構域和恒定結構域的混合形成。所產生的抗體對目標物質的表位具有高親和力。

8.一旦雜交瘤細胞穩定，即可獲很多供應的高性價比均質抗體。

9.廣泛應用于疫苗生產研究。

10.雜交瘤抗體生產廣泛應用于診斷和治療程序中。

參考聲明

所列的所有服務和產品均僅供研究使用（For Research Use Only），不得用于任何診斷或治療用途。

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