【Abcam實(shí)驗(yàn)支持】如何確定蛋白濃度？

確定溶液中蛋白含量最快的方法是使用 UV-vis 直接測(cè)定吸光度，但是通常這種方法不夠準(zhǔn)確或者不夠靈敏。 

使用 Bradford 或 BCA 檢測(cè)可以對(duì)大多數(shù)蛋白質(zhì)進(jìn)行高度準(zhǔn)確的定量。

如何使用 UV-vis 確定蛋白質(zhì)濃度？

蛋白濃度可通過(guò)測(cè)量 280 nm 處的 UV 吸光度來(lái)估算；蛋白質(zhì)因其色氨酸和酪氨酸殘基的吸光作用而在此處出現(xiàn)一個(gè)高吸收峰（通常稱(chēng)為 A280）。 使用比爾-蘭伯特定律（見(jiàn)下方公式）可以輕松將該峰值轉(zhuǎn)化為蛋白濃度。 這種方法主要用于粗略估計(jì)濃度，例如驗(yàn)證純化是否成功。

A = ?cl

●A 代表吸光度（如 A280）

● 代表摩爾消光系數(shù) (M?-1cm-1)，可從文獻(xiàn)中查到 

●c 代表濃度（單位為 M）

●l 代表路徑長(zhǎng)度，即比色皿/微孔板的長(zhǎng)度，單位為 cm

如何使用 Bradford 檢測(cè)確定蛋白質(zhì)濃度？

Bradford 檢測(cè)是一種比色法檢測(cè)，需要借助蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍(lán)的結(jié)合。

●當(dāng)染料在酸性介質(zhì)中與蛋白質(zhì)結(jié)合時(shí)，最大吸收波長(zhǎng)從 465 nm 變?yōu)?595 nm，顏色從棕色變?yōu)樗{(lán)色。

●未知的蛋白質(zhì)濃度是通過(guò)參考濃度已知的蛋白質(zhì)（通常是牛血清白蛋白 [BSA]）的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)估算得到的。

如何使用 BCA 檢測(cè)確定蛋白質(zhì)濃度？

BCA 檢測(cè)是一種比色法檢測(cè)，其原理是，Cu2  離子被蛋白質(zhì)還原，隨后與 BCA 相結(jié)合。

●生成的 Cu+ 離子與 BCA 試劑形成深色復(fù)合物，其在 562 nm 處具有很強(qiáng)的吸光度。

●未知的蛋白質(zhì)濃度是通過(guò)參考濃度已知的蛋白質(zhì)（通常是牛血清白蛋白 [BSA]）的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)估算得到的。

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