【Abcam實(shí)驗(yàn)支持】如何確定 ELISA 檢測(cè)范圍？

ELISA 的動(dòng)態(tài)范圍是指試劑盒能夠準(zhǔn)確測(cè)定的抗原濃度范圍。 

閱讀下文，詳細(xì)了解如何確定動(dòng)態(tài)范圍以及如何解讀不同樣本類(lèi)型下的動(dòng)態(tài)范圍。

如何計(jì)算動(dòng)態(tài)范圍？

動(dòng)態(tài)范圍可以通過(guò)繪制抗原濃度與檢測(cè)信號(hào)之間關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)確定。

準(zhǔn)確且符合動(dòng)態(tài)范圍的檢測(cè)必須滿(mǎn)足以下條件：

●標(biāo)準(zhǔn)品平行試樣之間的標(biāo)準(zhǔn)偏差較低

●抗原濃度與檢測(cè)信號(hào)之間的相關(guān)性較強(qiáng)

我們的 ELISA 試劑盒說(shuō)明書(shū)和實(shí)驗(yàn)方案通常會(huì)詳細(xì)說(shuō)明實(shí)驗(yàn)樣本的動(dòng)態(tài)檢測(cè)范圍，該動(dòng)態(tài)范圍已經(jīng)通過(guò)檢測(cè)進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)定。 這些動(dòng)態(tài)范圍通常有兩種表示方式：被測(cè)蛋白的濃度或稀釋度（后者更常見(jiàn)于血漿或血清等樣本）。

當(dāng)動(dòng)態(tài)范圍以濃度表示時(shí)，該如何解釋?zhuān)?/span>

Abcam 的人 Frataxin ELISA 試劑盒 (ab176112) 的實(shí)驗(yàn)方案包含一份表格，其中列出了預(yù)計(jì)位于動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)的各種細(xì)胞系裂解物的總蛋白濃度范圍。 測(cè)試時(shí)，這些濃度都在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)。

對(duì)于 HeLa 細(xì)胞裂解液：

●在動(dòng)態(tài)范圍的下限，ELISA 可以準(zhǔn)確檢測(cè)的總共濟(jì)蛋白濃度為 0.5 µg/mL

●在動(dòng)態(tài)范圍的上限，ELISA 可以準(zhǔn)確檢測(cè)的總共濟(jì)蛋白濃度為 100 µg/mL

●因此，動(dòng)態(tài)范圍表示為 0.5 – 100 µg/mL

當(dāng)動(dòng)態(tài)范圍以稀釋度或百分比表示時(shí)，該如何確定檢測(cè)范圍？

其他樣本類(lèi)型（如血清和血漿）的濃度動(dòng)態(tài)范圍通常以稀釋度（分?jǐn)?shù)或百分比）表示。

以 Abcam 腫瘤壞死因子 (TNF) α ELISA 試劑盒為例 (ab208348)。 該試劑盒實(shí)驗(yàn)方案中包含一份檢測(cè)范圍內(nèi)血漿樣本的稀釋倍數(shù)推薦表。

對(duì)于肝素血漿：

在動(dòng)態(tài)范圍的下限，ELISA 試劑盒可以準(zhǔn)確檢測(cè)稀釋度為 1/16（6.25/100，或 6.25%）的蛋白質(zhì)。

在動(dòng)態(tài)范圍的上限，ELISA 試劑盒可以準(zhǔn)確檢測(cè)未稀釋血漿中的蛋白質(zhì)（100/100 =1，或 100%）

因此，動(dòng)態(tài)范圍表示為 6.25 – 100%

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